摘要：以香菇(Lentinulaedodes)L9319和香菇9608的双核茵丝，分别与香菇L808的单核茵丝进行双单杂交，再将杂交子放于高温环境进行逆境胁迫试验。逆境处理后的香菇杂交子大部分出现茵丝失活，部分能够继续生长的杂交子扩大培养后，其中大部分出现茵丝生长缓慢或不延伸的现象，最后获得11株杂交子进入出菇试验。栽培结果表明高温胁迫处理的部分香菇杂交子表现出高产、高温出菇等优良性状。
关键词：香菇,双单杂交,逆境胁迫,杂交子
湖北省十堰市房县是我国最早进行香菇(Lentinulaedodes)栽培的地区之一，“房县香菇”、“房县小花菇”均为国家地理标志产品。香菇L9319一直是反季节栽培的主要品种，随着香菇L808的大面积推广逐渐替代了香菇L9319，十堰地区形成了以香菇9608为主要秋冬菇品种，L808为反季节夏季栽培品种的栽培模式。十堰市是湖北省少数能进行夏季香菇栽培的地区之一，夏季香菇以鲜销为主，而且价格可观，菇农鲜菇批发价最高可以卖到24元·kg～，因此进一步选育适合夏季生长的夏季香菇品种是非常必要的。
双单杂交技术是由“布勒现象”11】{}亍生而来，是1种目的性较强的常规育种手段，香菇的有性生殖方式为异宗结合。利用双单杂交技术，将具有优良特性的香菇双核菌丝，对需要改良菌株的单核菌丝进行双单配对，形成双核菌丝，从而选育出新的杂交菌株。
高温胁迫导致包括香菇在内的各种生物体产生一系列生理紊乱，是生理学研究的重要领域之一㈣。本研究使用双单杂交技术，先对亲本菌株进行杂交，再对所得杂交子菌丝进行高温逆境胁迫处理，获得一些菌丝可以正常生长的杂交子，随之进行出菇对比试验，初步筛选出了具有利用价值的杂交子。
l材料与方法
1．1供试菌株
香菇L808、L9319引自浙江省丽水市大山菇业研究开发有限公司，香菇9608引自河南西峡县真菌研究所。
1．2培养基
单孢子分离培养基：PDA培养基。双单杂交培养基：PDA培养基。逆境胁迫培养基：木屑80％、麸皮19％、石膏1％，含水量50％～55％，试管尺寸18minxl80mm。
1．3菌种配方
木屑60％、细木屑20％、麸皮18％、石膏1％、石灰1％，含水量50％一55％。
1．4栽培料配方
木屑80％、麸皮19％、石膏l％，含水量500／0--55％。
1．5双单杂交
收集L808的单核菌丝，与供体L9319和9608的双核菌丝分别对峙培养于同一PDA试管中，双核菌丝位于试管底部，单核菌丝位于试管中部，菌丝块之间相差4cm．5cm，25℃培养lOd一15d后，挑取单核菌丝靠近试管前端的边缘菌块镜检，具有锁状联合者视为杂交成功，并于试管中进行扩大培养。
1．6逆境胁迫处理
将扩大培养的杂交子菌丝接入试管木屑培养基中，棉花塞封口，25。C暗培养10d，待菌丝萌发延伸，将菌丝至于35。C培养箱中进行培养直到菌丝长满试管，培养箱为电热恒温培养箱(无水盘加湿)。
1．7杂交新菌株的筛选
将菌丝可以长满试管的杂交子直接制种，28℃暗培养30d～40d，然后淘汰菌丝生长过慢和无法萌发延伸的杂交子。
1．8栽培试验和子实体形态、形状的观察
按上述培养料配方，采用地面斜靠栽培模式进行对比试验，每个品种设3次重复，代料干重1．2妇·袋一。记录各杂交子的污染率和子实体产量，计算其生物学效率，对每个杂交子子实体随机取样，测定各杂交子菌盖厚度、菌盖直径和菌柄直径。
2结果与分析
2．1双单杂交
将L9319和9608分别与收集的80份L808单核菌丝进行双单杂交，获得L9X8(L9319与L808双单杂交)杂交子63株，获得9X8(9608与L808双单杂交)杂交子56株。
2．2逆境胁迫处理结果
逆境胁迫处理后共获得31株杂交子，其中L9X8有22株，9X8有9株。制种后获得15株杂交子菌种，其中L9X8有12株，9X8有3株。
2．3栽培试验结果
2．3．1杂交子养菌结果的比较
表1列出了各杂交子在不同时期的污染情况。由表1可知，大部分杂交子菌丝抗杂能力很差，污染集中表现在刺孑L后，只有L9X8—3和L9X8—40的菌丝生长良好。
2．3．2进入出菇期杂交子特征
表2列出了能够出菇的杂交子的出菇分布情况和产量。
由表2可见，大部分杂交子产量很低，且集中在前2潮出菇，杂交子L9X8—3呈爆发性出菇，且产量最高，均产达到988．9g·棒～，而杂交子L9X8—7在第3潮开始出菇。经过逆境处理能够正常生长的杂交子菌丝吃料情况无明显差异。产量方面除L9X8—3外，其余杂交子产量均低于对照。部分杂交子子实体特征见图1、图2和表3。
从表3、图1和图2可以看出，经过逆境处理后，部分杂交子子实体特征表现为L9X8—7子实体大量出现畸形，经测量菌柄平均直径达到24．73mm，菌盖不易开伞；9X8—40子实体菇形大，易开伞，容易形成片菇。
3讨论
单单杂交、双单杂交、多孢自交已广泛使用在食用菌育种中，本研究经过逆境胁迫处理所获杂交子L9X8—3呈现出爆发性出菇、子实体丛生、菌盖面黑、产量高等特点，高产的特征值得将其作为育种材料进一步进行回交试验；9X8—40子实体特征为板菇(俗称的大片菇)，虽然这一特点不管是在鲜销市场还是干货市场均不被看好，但其比较符合美国香菇工厂化品种的需求，拥有一定的潜在价值；杂交子L9X8—7在第3潮开始出菇(7月份)，此高温出菇的特征值得将其作为育种材料进一步研究，而且其菇柄肥厚，很适合用于香菇加工，随着香菇产业的不断发展，该品种同样拥有一定的潜在价值。
本研究采用对杂交菌株进行高温逆境胁迫的处理方式。结果表明，所获部分杂交子在子实体形态方面有了明显改变，至于获得杂交菌株性状能否遗传，则有待于进一步研究。
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