摘要目的：探究丹参调节肾组织水通道蛋白２（Aquaporin２，AQP２）效应与其活血利尿功效的相关性，为临床用药提供指导。方法：收集３０只大鼠，分成正常组、模型组和丹参组，其中模型组和丹参组采用定量化打击法制备血瘀证模型，对照组和模型组用生理盐水１０μl／g灌胃，丹参组用丹参混悬液１g／kg灌胃，均持续治疗１周，１周后用免疫组化法观察３组在AQP２蛋白表达情况，观察其在局部肌肉、肾组织病理变化。结果：尿量上丹参组（２４．６７±４．１３）ml，模型组（１３．２４±２．１５）ml，正常组（７．１１±０．８７）ml，丹参组显著高于其他两组（P＜０．０５）；模型组AQP２浓度、肾组织AQP２表达、Westernblot表达分别为（１３．１３±０．８５）、（１１５６．７４±９８．５９）、（０．３２±０．０６）mg／L，丹参组则分别为（７．９９±０．５７）、（６９４．３１±２３．４６）、（０．１２±０．０３）mg／L，模型组显著高于丹参组（P＜０．０５），正常组和丹参组在以上三个指标上比较差异无统计学意义（P＞０．０５）。病理组织学上，模型组局部肌纤维索损伤，周围炎性细胞浸润显著，肾小球不同程度扩张，上皮细胞增生，毛细血管肿胀，肾小管扩张变性，毛细血管充血显著。丹参组肌纤维接近正常，肾小管-间质变显著改善，仅有少数毛细血管扩张，但程度均较轻，而正常组肌纤维结构清晰，肾小球正常，肾小管上皮细胞排列整齐。故丹参组运用后能促使模型小鼠病理组织上趋向正常。结论：丹参的活血利尿功效可能和其降低肾小管AQP２水平紧密相关。
主题词：丹参 水通道蛋白２ 动物实验 大鼠
祖国医学称“血不利则为水，血水本同源”，提示血和水在生理上相互化生且功用相近，病理上则“瘀水关联”，强调对血瘀证治疗关键是活血利水。水通道蛋白２（AQP２）广泛存在于肾脏远端小管和集合管的主细胞顶膜中，其作用作用是参与尿浓缩和稀释功能，和肾的“利尿”作用相近。丹参作为临床上应用最广泛的中医药材，其具有“活血化瘀、曲瘀止痛、凉血养血，安神”等功效，现代药理学证实，丹参具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、抗血栓形成，同时能改善微循环和减少血管内皮细胞损伤，能降低血管通透性，能减少组织水肿，同时能调节AQP２表达。研究指出，中医活血利尿本质是上调AQP２蛋白表达，促使局部肌肉和肾组织水吸收入红细胞和血浆，通过代谢将水液消耗，降低AQP２蛋白表达，促使肾组织水通过尿液排出，实现消肿利尿，从而减轻组织血瘀和水肿病理状态。基于此，本次研究做如下实验，以证实该结论，为临床用药提供有力依据。
材料与方法
１材料收集３０只大鼠，分成正常组、模型组和丹参组，每组均为１０只，均为雄性，体重１５０～２１０g，平均（１８０±２０）g；药物均购自复旦大学临床实验室研究中心，丹参根据《中国药点》提取称丹参干燥成粉剂，给药前用生理盐水调成混悬液，将丹参调剂成１g／ml。
２方法将３０只大鼠分成三组，正常组不建立模型，每日常规喂养生理盐水１０μl／g。模型组和丹参组则采用定量化打击法进行造模型，即将大鼠右后肢放置在打击器上，砝码为５００g，高度为５８cm，自由落下后打击在后肢内侧中上部，成功标志为单侧肢体跛行，无皮肤破损，无出血，无骨折，模型组继续生理盐水１０μl／g灌胃，丹参组则用丹参混悬液１g／kg灌胃，均连续治疗１周。１２周后处死，取局部肌肉和肾组织，部分标本迅速放入在４％多聚甲醛中进行固定，进行免疫组化和病理学观察，用肾组织匀浆WesternBlot法检测AQP２蛋白表达。观察在肾组织AQP２蛋白表达情况。
３统计学方法数据处理软件包为SPSS１６．０，计量资料比较采用t检验，等量资料以Xx±s表示，计数资料比较采用χ２检验，P＜０．０５表示差异有统计学意义。
结果
１各组尿量和AQP２浓度等指标比较尿量上以丹参组含量最高，和其他两组比较差异显著（P＜０．０５），而在AQP２浓度、肾组织AQP２表达、Westernblot表达上以模型组最高，和其他两组比较差异显著（P＜０．０５），而正常组和丹参组在以上三个指标上比较差异则不显著（P＞０．０５），见表１。
２三组病理组织学观察正常组肌纤维结构清晰，肾小球正常，肾小管上皮细胞排列整齐。模型组局部肌纤维索损伤，周围炎性细胞浸润显著，肾小球不同程度扩张，上皮细胞增生，毛细血管肿胀，肾小管扩张变性，毛细血管充血显著。丹参组肌纤维接近正常，肾小管-间质变显著改善，仅有少数毛细血管扩张，但程度均较轻。
讨论
水通道蛋白是近２０年发现的一种广泛存在机体各器官组织内，对水高度选择性的细胞膜转运蛋白，其主要分布在和液体吸收和分泌紧密相关的内皮细胞和上皮细胞上，参与调节和水跨细胞膜转运相关的病理和生理过程。目前对AQP在临床上可分成１３个亚型，AQP２主要分布在肾脏中，其主要是表达在远端小管和集合管主细胞顶膜中，其主要参与尿液稀释浓缩。研究称，AQP２集合管中约有３％随尿液排出体外，在不同生理或病理下，其排出量不同，故可将AQP２作为肾功能的一个重要检测指标。
结果显示，AQP２浓度、肾组织AQP２表达、Westernblot表达上以模型组最高，而在尿量上则以丹参组最高，这点和报道结论是一致的，实验证明，糖尿病肾损伤模型组织AQP２表达增多，丹参则能显著降低糖尿病大鼠肾组织中的AQP２蛋白表达，在肾脏AQP１高表达中近端小管和髓袢支细段上皮细胞顶膜和侧膜，其主要参与水重吸收。当AQP１表达下降则代表肾脏对水重吸收功能减弱，AQP２表达增加则表示其原尿重吸收能力增加，故两者有协同作用，能促使尿量增加。这也证实外伤后血瘀证大鼠在AQP２表达上增加显著，故尿液较正常显著增加。
丹参在临床上能降低血管通透性，能减轻血管源性水肿，能增加肾血流，且有利尿、调节肾组织局部微循环等作用。研究指出，丹参能上调急慢性肺损伤的微血管内皮细胞AQP２蛋白的表达，能降低胆汁淤积性肝硬化大鼠肝硬化AQP２表达。报道称，丹参能减轻血瘀证大鼠局部肌肉和肾组织血管内皮细胞损伤，能调高血管内皮细胞膜中的水通道蛋白表达，能减轻局部肾组织瘀肿，故丹参有很好“活血消肿”作用。结果显示，丹参组在AQP２浓度、肾组织AQP２表达、Westernblot表达上和正常组相近，而在尿量上则显著高于正常组和模型组，且在病理组织学上也和正常组相近，这证实丹参能下调肾组织AQP２表达，能增加肾排出尿液功能，推断出AQP２能促使肾小管对原尿水重吸收有关，故丹参的活血功效其中主要和肾脏的利尿是一致的。
总之，丹参能降低肾脏远端小管和集合管主细胞的AQP２表达，能升高近端血管上皮细胞的AQP１表达，故其能减少肾对原尿的重吸收功能，增加尿量，同时能减少肾水肿。而当体内水液不足，则AQP２表达增加，尿量减少，因AQP２能随尿液排出３％，故其能在一定程度上反映肾组织利尿和水肿疾病相关性，故丹参的“活血利尿”功效可能和其调节肾小管AQP２水平紧密相关。
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